ວິທີການຄົ້ນຄ້ວາທາງພັນທຸກໍາ Molecular

ການສໍາຫຼວດແລະກໍານົດ variants ໃນໂຄງສ້າງ DNA ນໍາໃຊ້ວິທີການທາງພັນທຸກໍາການແຜ່ກະ. ສໍາລັບແຕ່ລະພາກພື້ນ DNA, ເຊິ່ງ explores ພື້ນຂອງໂຄໂມໂຊມ, gene ຫຼື allele ນີ້, ວິທີການທີ່ແຕກຕ່າງກັນ. ຕິດພັນວິທີທາງພັນທຸກໍາແຕ່ລະໂມເລກຸນປະກອບດ້ວຍຈໍານວນຫນຶ່ງຫຼືການຫມູນໃຊ້ອື່ນໆຂອງ RNA ແລະ DNA. ວິທີການທັງຫມົດເຫຼົ່ານີ້ມີລັກສະນະເປັນຄວາມສັບສົນອັນໃຫຍ່ຫຼວງ, ໂດຍບໍ່ມີການສະພາບຫ້ອງທົດລອງບໍ່ສາມາດໄດ້ຮັບການປະຕິບັດ, ແລະພະນັກງານທີ່ຈະຕ້ອງມີຄຸນສົມບັດດີທີ່ສຸດ. ວຽກດັ່ງກ່າວນີ້ໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນໄລຍະຫຼາຍ.

ຂັ້ນຕອນ

ຫນ້າທໍາອິດ, RNA ຫຼື DNA ຕົວຢ່າງເພື່ອໄດ້ຮັບການຜະລິດ. ທີ່ນີ້, ວິທີການທາງພັນທຸກໍາການແຜ່ກະສາມາດໄດ້ຮັບການນໍາໃຊ້ກັບ virtually ອຸປະກອນໃດຫນຶ່ງ: ການຫຼຸດລົງຂອງເລືອດ, ເມັດເລືອດຂາວ, fibroblasts ວັດທະນະທໍາ, mucosa (scraped), ເຖິງແມ່ນວ່າຮູຂຸມຂົນ, - DNA ສາມາດໄດ້ຮັບຈາກຕົວຢ່າງໃດໆ. ມັນເປັນທີ່ເຫມາະສົມທີ່ຈະນໍາໃຊ້ວິທີການທາງພັນທຸກໍາໃດໂມເລກຸນແລະທາງເລືອກໃນການຕ່າງໆຂອງເຂົາເຈົ້າແລະໄດ້ DNA ຫ່າງໄກສອກຫລີກຍາວຈະຖືກເກັບໄວ້ frozen. ຂັ້ນຕອນທີສອງແມ່ນອຸທິດຕົນເພື່ອການສະສົມຂອງ fragments ທີ່ຕ້ອງການໄດ້ (ການຂະຫຍາຍ) ຂອງ DNA, ຍ້ອນວ່າມັນຈະຊ່ວຍໃຫ້ຮັບປະກັນຕິກິຣິຍາລະບົບຕ່ອງໂສ້ໂພລິເມີໃນຫລອດທົດລອງ (in vitro ໂດຍບໍ່ມີການມີສ່ວນຮ່ວມຂອງອົງການຈັດຕັ້ງດໍາລົງຊີວິດ). ດັ່ງນັ້ນ, ການຄັດເລືອກ multiplies ຊິ້ນ DNA ໂດຍຕິກິຣິຍາລະບົບຕ່ອງໂສ້ນີ້, ແລະຈໍານວນຂອງການເພີ່ມຂຶ້ນຂອງ DNA ຮູ້ຫນັງສືລ້ານຂອງເວລາ.

ຂັ້ນຕອນທີສາມໃນວິທີການຄົ້ນຄ້ວາທາງພັນທຸກໍາການແຜ່ກະແມ່ນສົມມຸດຈໍາກັດຄູນ DNA (fragmentation ນີ້, tearing ຫຼືຕັດ). ຈໍາກັດປະຕິບັດໂດຍ electrophoresis ສຸດ polyacrylamide ຫຼື gel agarose. ນີ້ວິທີການແຜ່ພັນທຸກໍາຂອງການສຶກສາຊິ້ນດີເອັນເອອະນຸຍາດໃຫ້ທຸກຄົນທີ່ຈະໄດ້ຕໍາແຫນ່ງທີ່ແນ່ນອນໃນເຈນ. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, gel ໄດ້ຖືກຮັບການປິ່ນປົວທີ່ມີ ethidium bromide, ສາມາດຜູກມັດກັບ DNA, irradiation ທີ່ມີແສງສະຫວ່າງ ultraviolet, ຫຼັງຈາກນັ້ນມັນເປັນໄປໄດ້ເພື່ອສັງເກດເບິ່ງບາງສ່ວນຂອງ luminescence. ໂມເລກຸນວິທີການບົ່ງມະຕິທາງພັນທຸກໍາມີການປ່ຽນແປງແລະຈໍານວນຫລາຍ, ແຕ່ທັງສອງຂັ້ນຕອນທໍາອິດເປັນເລື່ອງທໍາມະທັງຫມົດ. ແຕ່ໃນຄໍາສັ່ງເພື່ອກໍານົດຊິ້ນ DNA, gel ສາມາດໄດ້ຮັບການສີ, ແລະຈໍານວນຫຼາຍວິທີການທີ່ມີຢູ່ແລ້ວອື່ນໆ.

ຊະນິດ

ວິທີການໂດຍກົງທີ່ສຸດແລະແຜ່ຂະຫຍາຍຫຼາຍສໍາລັບການກວດ mycobacteria ອາດຈະປະກອບຂ້າງເທິງວິທີການຮຽນຮູ້ DNA ທາງພັນທຸກໍາການແຜ່ກະ. ໂດຍເນື້ອແທ້ແລ້ວຂອງມັນແມ່ນວ່າ, ໃນຄໍາສັ່ງເພື່ອກໍານົດອຸປະກອນການລະບົບຕ່ອງໂສ້ສະແກນຂອງຊິ້ນສະເພາະໃດຫນຶ່ງຂອງ DNA ຂອງເຊື້ອພະຍາດ. Molecular ເຕັກນິກການບົ່ງມະຕິທາງພັນທຸກໍາທີ່ຍັງບໍ່ທັນມີວິທີການປະສິດທິພາບຫຼາຍກວ່າທີ່ຈະຮັບຮູ້ພະຍາດດັ່ງກ່າວເປັນວັນນະໂລກ. ການນໍາໃຊ້ລະບົບຕ່ອງໂສ້ຕິກິຣິຍາໂພລິເມີ (PCR), ທ່ານສາມາດໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າວ່າ DNA ຕົ້ນສະບັບຈະເພີ່ມທະວີການຈໍານວນຂອງການສໍາເນົາຢູ່ໃນລ້ານຄັ້ງ, ນັ້ນຄືຈະມີການຂະຫຍາຍ, ແລະມັນຈະສະແດງຜົນໄດ້ຮັບ. ລະດັບທີ່ລະອຽດອ່ອນແມ່ນສູງຫຼາຍ - ຫຼາຍກ່ວາເກົ້າສິບຫ້າເປີເຊັນ, ເຊິ່ງເປັນປະໂຫຍດຕົ້ນຕໍຂອງວິທີການນີ້.

ສ່ວນທີ່ເຫຼືອຂອງວິທີການແຜ່ພັນທຸກໍາຂອງການຄົ້ນຄວ້າກ່ຽວກັບປະສິດທິພາບຂອງຜົນຜະລິດທີ່ຫຼາກຫຼາຍສໍາເນົາການຮູ້ຫນັງສືເພີ່ມຂຶ້ນເທົ່າຕົວ, ນັບຕັ້ງແຕ່ໃນກໍລະນີນີ້ຕົວຢ່າງຮ່າງການສະແດງໃຫ້ເຫັນເປັນລໍາດັບ Oligonucleotide ສະເພາະເພີ່ມຂຶ້ນກັບຫນຶ່ງຮ້ອຍແລະເວລາຫົກ. ເຖິງແມ່ນວ່າການວິນິດໄສວັດທະນະທໍາຂອງວັນນະໂລກຂອງລະບົບທາງເດີນຫາຍໃຈຢ່າງຫລວງຫລາຍຕ່ໍາຄວາມໄວຂອງຕົນ. ນີ້ແມ່ນວ່າເປັນຫຍັງຢາປົວພະຍາດທີ່ທັນສະໄຫມແມ່ນອີງໃສ່ວິທີການທາງພັນທຸກໍາໂມເລກຸນຂອງການບົ່ງມະຕິວັນນະໂລກ. A ວິທີການອະທິບາຍແມ່ນປະສິດທິພາບໂດຍສະເພາະໃນເວລາທີ່ຈັດການກັບເຊື້ອພະຍາດຂອງຕົວປ່ຽນແປງແອນຕິເຈນສູງ, ກໍານົດວ່າວິທີການອື່ນໆແມ່ນມີຫຼາຍມີຄວາມຫຍຸ້ງຍາກ - ຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການພິເສດ ສື່ມວນຊົນຂາດທາດອາຫານ ແລະການປູກທີ່ໃຊ້ເວລາດົນນານ. ວິທີທາງພັນທຸກໍາຊີວະເຄມີແລະໂມເລກຸນຜະລິດຜົນກະທົບທີ່ແຕກຕ່າງກັນຫຼາຍກ່ຽວກັບຜົນໄດ້ຮັບ.

ການບົ່ງມະຕິວັນນະໂລກ

ການບົ່ງມະຕິພົັນ PCR ຂອງວັນນະໂລກທົ່ວໄປຫຼາຍທີ່ສຸດການນໍາໃຊ້ຜູ້ລໍາດັບ DNA ທີ່ສະເພາະໃດຫນຶ່ງສໍາລັບການທັງຫມົດສີ່ປະເພດຂອງພະຍາດ. ເພື່ອບັນລຸເປົ້າຫມາຍນີ້ມັກຈະໃຊ້ໄພເມີທີ່ກວດສອບລໍາດັບເປັນອົງປະກອບ (IS-986, IS-6110), ເປັນອົງປະກອບເຫຼົ່ານີ້ລັກສະນະຊະນິດທີ່ເຄື່ອນຍ້າຍໄປຢ່າງເປັນວັນນະໂລກ Mycobacterium ແລະສະເຫມີສໍາເນົາຫຼາຍປະຈຸບັນໃນຈີໂນມ. ນອກຈາກນີ້ການສະກັດເອົາ DNA ສາມາດໄດ້ຮັບການປະຕິບັດຈາກວັດທະນະທໍາອັນບໍລິສຸດແລະທາງດ້ານການຊ່ວຍ (ເບິ່ງຂີ້ກະເທີເຊັນ) ໂດຍວິທີການທີ່ເຫມາະສົມອື່ນໆ. ສໍາລັບຕົວຢ່າງ, ມີວິທີການຂະຫຍາຍຕົວຢ່າງບ່ອນທີ່ປ້ອງກັນ Lysis ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ໂດຍອີງໃສ່ການ Thiocyanate guanidine ແລະຊິລິກາເປັນ DNA ບັນທຸກໄດ້. ຈໍານວນຜູ້ປ່ວຍທີ່ມີຄວາມແຕກຕ່າງ bacteriological ທຸກຍາກເພີ່ມຂຶ້ນທຸກປີ, ແລະດັ່ງນັ້ນຈິ່ງປະຕິບັດທາງດ້ານການຊ່ວຍໄດ້ຖືກສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນໃນລະດັບທີ່ແຕກຕ່າງກັນຫມົດຂອງອົງການຈັດຕັ້ງ: ວິທີການແຜ່ພັນທຸກໍາຂອງການສຶກສາ DNA ໄດ້ຮັບການຫຼີ້ນບົດບາດສໍາຄັນໃນການບົ່ງມະຕິ.

ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ພວກເຮົາຕ້ອງຍອມຮັບວ່າມັນບໍ່ແມ່ນບໍ່ມີຈຸດອ່ອນໄດ້. ວິທີ PCR ແມ່ນການນໍາໃຊ້ຂອງມັກເອົາຈໍານວນຂະຫນາດໃຫຍ່ຂອງຜົນໄດ້ຮັບທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ, ໃນທາງບວກ, ແລະເຫດຜົນ, ບໍ່ແມ່ນຄວາມຜິດພາດດ້ານວິຊາການເທົ່ານັ້ນ, ແຕ່ຍັງລັກສະນະຂອງວິທີການຂອງຕົນເອງໄດ້. ໃນນອກຈາກນັ້ນ, ການນໍາໃຊ້ວິທີການຂອງການບົ່ງມະຕິນີ້ຈະກໍານົດຢູ່ລອດທາງດ້ານຂອງ mycobacteria, ຊຶ່ງໄດ້ຖືກກໍານົດ, ມັນເປັນເພງນຶ່ງໃນດວງພຽງແຕ່. ແຕ່ຄົນດ້ອຍໂອກາດນີ້ບໍ່ແມ່ນສໍາຄັນທີ່ສຸດ. ວິທີກໍາມະພັນໂມເລກຸນຂອງການບົ່ງມະຕິ PCR ສູ່ຄວາມສ່ຽງຕໍ່ການປົນເປື້ອນຂອງ DNA mycobacterial ໄດ້. ຄວາມຕ້ອງການການຢັ້ງຢືນສໍາລັບເຫດຜົນນີ້ວ່າສໍາລັບຫ້ອງປະຕິບັດສໍາເລັດໂຄງການອອກແບບສະເພາະຍາກ, ພວກເຂົາເຈົ້າຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີສາມສະຖານທີ່ແຍກຕ່າງຫາກ. ເຕັກໂນໂລຊີ PCR ແມ່ນທັນສະໄຫມແລະສະລັບສັບຊ້ອນທີ່ສຸດ, ມັນຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການນໍາໃຊ້ຂອງອຸປະກອນທີ່ເຫມາະສົມແລະບຸກຄະລາກອນສູງການຝຶກອົບຮົມ.

bacterioscopy

ໃນເວລາທີ່ຜົນໄດ້ຮັບການວິນິດໄສການວິເຄາະຈະຕ້ອງໄດ້ຮັບການປຽບທຽບກັບຂໍ້ມູນອື່ນໆ: ການກວດສອບທາງດ້ານການຊ່ວຍ, radiography, ກ້ອງຈຸລະທັດ smear, ການປູກພືດແລະແມ້ກະທັ້ງຕອບສະຫນອງຕໍ່ການປິ່ນປົວສະເພາະໃດຫນຶ່ງມີຄວາມສໍາຄັນຫຼາຍ. ໃນໄລຍະດັ່ງກ່າວນີ້, ການສຶກສາ PCR ແມ່ນພຽງແຕ່ຫນຶ່ງໃນອົງປະກອບທີ່. ກວດສອບເຊື້ອພະຍາດໄດ້ໃນການວິນິດໄສທີ່ສາມາດເປັນທີ່ງ່າຍແລະໄວທີ່ສຸດວິທີການ - bacteriological.

ມີໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນກ້ອງຈຸລະທັດແສງສະຫວ່າງ (ສີ Ziehl-Neelsen) ແລະ fluorescent (ສີ fluorochromes). ປະໂຫຍດແມ່ນຄວາມໄວ smear ຜົນໄດ້ຮັບ. ແຕ່ອຸປະສັກຂອງຕົນພິຈາລະນາຢ່າງຖືກຕ້ອງຄວາມສາມາດຈໍາກັດເນື່ອງຈາກຄວາມອ່ອນໄຫວຕ່ໍາ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ວິທີການນີ້ແມ່ນໄດ້ຮັບຄໍາແນະນໍາທີ່ເປັນເສດຖະກິດຫຼາຍທີ່ສຸດແລະພື້ນທີ່ໃນການກວດສອບຜູ້ປ່ວຍວັນນະໂລກ. ການຊອກຄົ້ນຫາຂອງວິທີການ bacteriological mycobacteria ມີມູນຄ່າຄາດຄະເນແລະຄາດຄະເນການຂັບຖ່າຍເຊື້ອຈຸລິນຊີປະລິມານ. ຫຼາຍຄວາມຫມັ້ນໃຈເພີ່ມເຕີມຕໍ່ກັບການຈັດການກັບມັນໂມເລກຸນວິທີການຄົ້ນຄ້ວາທາງພັນທຸກໍາຂອງວັນນະໂລກ.

ວັດທະນະທໍາ

ການຊອກຄົ້ນຫາທີ່ດີກວ່າຂອງ mycobacteria ຮັບຮູ້ສຶກສາວັດທະນະທໍາ. ການປູກດ້ວຍແກ່ນວັດສະດຸ pathological ມັນໄດ້ກາຍເປັນຂະຫນາດກາງໄຂ່ໄດ້: Mordovskie, Finn II, LJ, ແລະຄື. ມາດຕະຖານການຕໍ່ຕ້ານຂອງ mycobacteria ຢາແລະຫຼັກຖານທາງອ້ອມຂອງປະສິດທິພາບຂອງຈໍານວນຂອງ mycobacteria ແລະອານານິຄົມຂອງເຂົາເຈົ້າໃນຫລອດທົດລອງ, ຖ້າຫາກວ່າວິທີການນໍາໃຊ້ຂອງວັດທະນະທໍາການຄົ້ນຄວ້າ. ເພື່ອເພີ່ມອັດຕາສ່ວນຂອງຫ່າງໄກສອກຫລີກຂອງ inoculation mycobacteria ຂອງວັດສະດຸ pathological ໄດ້ຈັດຂຶ້ນໃນສະພາບແວດລ້ອມທີ່ຫຼາກຫຼາຍໄດ້.

ປະຊຸມຄວາມຕ້ອງການຂອງຈໍານວນວັດທະນະທໍາ, ເຊື້ອພະຍາດລວມທັງທຶນຊ່ວຍເຫຼືອລ້າແລະນ້ໍາ. ໃຊ້ໃນລະບົບນີ້ແລະປະເພດວັດອັດຕະໂນມັດການຂະຫຍາຍຕົວ vant. ພືດຕ້ອງໄດ້ຮັບການຈັດຂຶ້ນໃນບ່ອນສໍາລັບສູງເຖິງເຈັດຫາແປດອາທິດ. ໂດຍໃຊ້ເວລານີ້ການປູກພືດທີ່ມີການຂາດການຂະຫຍາຍຕົວສາມາດໄດ້ຮັບການພິຈາລະນາໃນທາງລົບ. ວິທີທີ່ປະສິດທິພາບຫຼາຍທີ່ສຸດໃນການກວດສອບວັນນະໂລກ Mycobacterium ພິຈາລະນາຕົວຢ່າງຊີວະພາບ: ການວິເຄາະຂອງວັດສະດຸ infect ຫມູກິວນີ, ເຊິ່ງມີຄວາມອ່ອນໄຫວທີ່ສຸດທີ່ຈະ TB.

ຕົວເລກຈໍານວນ

ພາກສະຫນາມທີ່ຫນ້າສົນໃຈຂອງການສຶກສາ, ເຊິ່ງໄດ້ເປີດໂດຍການວິນິດໄສ PCR ແມ່ນເພື່ອສຶກສາຄວາມເປັນ M. ວັນນະໂລກ - ການຕິດເຊື້ອ latent. ແນວຄວາມຄິດທີ່ທັນສະໄຫມຂອງພະຍາດຊຶມເຊື້ອ TB ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າອອກຈາກຮ້ອຍປະຊາຊົນຜູ້ທີ່ຢູ່ໃນການພົວພັນກັບ M. ວັນນະໂລກ, ເກົ້າສິບ, ດີອາດຈະຕິດເຊື້ອ, ແຕ່ພຽງແຕ່ສິບຂອງພວກເຂົາແມ່ນພະຍາດມີການເຄື່ອນໄຫວກໍາລັງພັດທະນາ. ຄົນອື່ນມີພູມຕ້ານທານ TB ແລະເນື່ອງຈາກວ່າ ninety ສ່ວນຮ້ອຍຂອງກໍລະນີພະຍາດຊຶມເຊື້ອທີ່ຍັງແອບແຝງ. ກວດສອບຮູບແບບເປັນມັນໄດ້ຊ່ວຍເປັນວິທີທາງພັນທຸກໍາການແຜ່ກະ.

geneticist ເວົ້າວ່າເປີເຊັນຫ້າສິບຫ້າຂອງຄົນທີ່ມີການປູກພືດ pathological ວັດສະດຸໄດ້ລົບ, ແລະ eighty ສ່ວນຮ້ອຍຂອງປະຊາຊົນທີ່ຕິດເຊື້ອ M. ວັນນະໂລກ, ແຕ່ໄຫຼກັບບໍ່ມີ manifestations radiographic ຂອງພະຍາດ, PCR ຕອບໃນທາງບວກໄດ້ຮັບ. ມັນເປັນວິທີການວິນິດໄສຂອງພັນທຸກໍາຊ່ວຍໃນການລະບຸຜູ້ປ່ວຍທີ່ມີຄວາມສ່ຽງໂດຍການສຶກສາ PCR, ມີຜົນໄດ້ຮັບຂອງການວິເຄາະຂອງພວກເຂົາ (ກ້ອງຈຸລະທັດແລະວັດທະນະທໍາ) ໄດ້ຖືກລົບ, ແລະການຕິດເຊື້ອແດງ M. ວັນນະໂລກແມ່ນປະຈຸບັນ.

ຄົ້ນຄ້ວາທີ່ທັນສະໄຫມ

ຂອງສະຫະພັນລັດເຊຍແລະຫ້ອງປະຕິບັດ bacteriological ໃຊ້ວິທີການເລັ່ງລັດຫລືຂອງຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງຢ່າງແທ້ຈິງ: ກິດຈະກໍາ reductase nitrate ຂອງ mycobacteria ການທົດສອບໂດຍ Griess reagent. ສູນຕ້ານ TB ນໍາໃຊ້ວິທີການທີ່ອະນຸຍາດໃຫ້ການກໍານົດການຕໍ່ຕ້ານຢາເສບຕິດໄດ້. ແນວພັນນີ້ໃນສື່ມວນຊົນນ້ໍາ, ບ່ອນທີ່ອັດຕະໂນມັດຄຶ້ນວິທະຍຸແລະລະບົບການບັນຊີ fluorescent ການຂະຫຍາຍຕົວຂອງ mycobacteria. ດັ່ງກ່າວເປັນການວິເຄາະແມ່ນເຮັດຢ່າງວ່ອງໄວ - ສູງເຖິງສອງອາທິດ.

ປະຈຸບັນ, ວິທີການໃຫມ່ທີ່ຖືກພັດທະນາ: ການຕໍ່ຕ້ານຢາເສບຕິດຂອງ mycobacteria ແມ່ນການວັດແທກໃນລະດັບພັນໄດ້. ສຶກສາກ່ຽວກັບກົນໄກການໂມເລກຸນຂອງເຊື້ອການຕໍ່ຕ້ານແລະສະແດງໃຫ້ເຫັນຢູ່ໃນ mycobacteria ໄດ້. Gene ເຫຼົ່ານີ້ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການຕໍ່ຕ້ານກັບຢາເສບຕິດບາງ. ສໍາລັບຕົວຢ່າງ, genes Kasa, Inha, katG ທົນທານຕໍ່ກັບ isoniazid, gene rpoB - rifampicin 16Sp ຍີນ RNA ແລະ rpsL - streptomycin, emb1 - ເພື່ອເອຕາມບູໂຕນ, gyrA - ເປັນຢາ fluoroquinolones ແລະອື່ນໆ.

mutations

ການບົ່ງມະຕິທີ່ທັນສະໄຫມຢ່າງຫຼວງຫຼາຍເພີ່ມຂຶ້ນໃນວິທີການໃນລະດັບໂມເລກຸນພັນທຸກໍາສໍາລັບການຮຽນ DNA ແລະອະນຸຍາດໃຫ້ປະຕິບັດການສຶກສາຂະຫນາດໃຫຍ່ຂອງ mutations ໃນທຸກຄື່ນຄວາມຖີ່ຂອງເຂົາເຈົ້າ. ໃນປັດຈຸບັນພວກເຮົາຮູ້ວ່າການປ່ຽນແປງທົ່ວໄປຫຼາຍທີ່ສຸດໃນ 516, 526 ແລະ 531 codons gene rpoB, ແລະລະບຸການຕໍ່ຕ້ານກັບຢາເສບຕິດຕ່າງໆ. ມີລະດັບຄວາມທັງຫມົດຂອງວິທີການສໍາລັບການລົບລ້າງການຂອງ mycobacteria ໃຊ້ວິທີການດັ້ງເດີມບໍ່ພຽງແຕ່ແມ່ນ - ຊີວະເຄມີ, ຊີວະສາດແລະວັດທະນະທໍາ, ແຕ່ຍັງນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງເຕັກນິກທາງພັນທຸກໍາທີ່ທັນສະໄຫມໂມເລກຸນ. ແລ້ວມີຢ່າງພຽງພໍແລະສະຫນອງວິທີການບົ່ງມະຕິທີ່ຖືກຕ້ອງສໍາລັບການຊອກຄົ້ນຫາຂອງພະຍາດ monogenic ໄດ້. ພວກເຂົາເຈົ້າແມ່ນອີງໃສ່ການສຶກສາ DNA ໃນພື້ນທີ່ຄືກັນອ້ອຍຕ້ອຍຂອງ gene ໂດຍສະເພາະ. ນີ້ປົກກະຕິແລ້ວແມ່ນຂະບວນການສະລັບສັບຊ້ອນ, ທີ່ໃຊ້ເວລາແລະຄ່າໃຊ້ຈ່າຍ, ແຕ່ຂໍ້ມູນທີ່ສະຫນອງໃຫ້ໂດຍການວິເຄາະທາງພັນທຸກໍາໂມເລກຸນມີຄວາມຖືກຕ້ອງຫລາຍຂຶ້ນແລະໃຫ້ຂໍ້ມູນກ່ວາຂໍ້ມູນທີ່ວິເຄາະອື່ນໆທັງຫມົດ.

ມັນໄດ້ເປັນທີ່ຮູ້ຈັກຍາວທີ່ DNA ບໍ່ມີການປ່ຽນແປງສໍາລັບຊີວິດທັງຫມົດຂອງອົງການຈັດຕັ້ງທີ່ມັນຢູ່ໃນຈຸລັງ nucleation odnakova ໃດ, ແລະນີ້ເຮັດໃຫ້ມັນເປັນໄປໄດ້ທີ່ຈະໃຊ້ເວລາການວິເຄາະຂອງຢ່າງແທ້ຈິງທັງຫມົດຈຸລັງຂອງຮ່າງກາຍໄດ້, ຢູ່ໃນຂັ້ນຕອນຂອງ ontogeny ໃດ. The gene ຄວາມເສຍຫາຍສາມາດໄດ້ຮັບການກວດພົບກ່ອນທີ່ຈະລັກສະນະຂອງອາການທໍາອິດທີ່ຈະໄດ້ພະຍາດທາງດ້ານການຊ່ວຍເຕັມຂະຫນາດ, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບໃນຄົນ heterozygous ສຸຂະພາບ, ແຕ່ມີ mutation ໃນ gene ໄດ້. Molecular ພະຍາດມໍລະດົກຂອງພັນທຸກໍາວິທີການບົ່ງມະຕິອະນຸຍາດໃຫ້ເປີດເຜີຍໃຫ້ເຫັນ (ວິທີໂດຍກົງ, DNA, ການວິນິດໄສ) ຂອງຕົນ, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບວິເຄາະແຍກອອກຕ່າງຫາກຂອງພະຍາດດັ່ງກ່າວໃນຄອບຄົວທີ່ມີ DNA ເຄື່ອງຫມາຍທ້ອງຖິ່ນ (ຫລາກຫລາຍພັນທຸກໍາ), ຊຶ່ງສາມາດເຊື່ອມໂຍງຢ່າງໃກ້ຊິດກັບ gene ຄວາມເສຍຫາຍ (ຕົວຢ່າງ, ວິທີທາງອ້ອມຂອງ DNA, ການບົ່ງມະຕິ). ໂດຍກົງຫຼືໂດຍທາງອ້ອມ - ການວິນິດໄສ DNA ໃດແມ່ນອີງໃສ່ວິທີການກໍານົດເປັນສ່ວນກໍານົດຢ່າງເຂັ້ມງວດຂອງ DNA ຂອງມະນຸດໄດ້.

ວິທີການໂດຍກົງ

ວິທີການໂດຍກົງຂອງການບົ່ງມະຕິ DNA ໃນເວລາທີ່ຜິດ gene ພະຍາດມໍລະດົກແມ່ນເປັນທີ່ຮູ້ຈັກ, ເປັນທີ່ຮູ້ຈັກດີ, ແລະປະເພດຂອງການປ່ຽນແປງຂອງຕົນ. ສໍາລັບຕົວຢ່າງ, ເປັນວິທີການໂດຍກົງທີ່ເຫມາະສົມໃນຈໍານວນຂອງພະຍາດ. ນີ້ ເຕັ້ນລໍາ Huntington ຂອງ (ນາມສະກຸນ CTG, ເຮັດເລື້ມຄືນ), phenylketonuria (R408W), fibrosis cystic (delF508 ການກາຍພັນທີ່ສໍາຄັນ) ແລະມັກ. ໄດ້ປະໂຫຍດຕົ້ນຕໍຂອງວິທີການໂດຍກົງເປັນຄວາມຖືກຕ້ອງວິນິດໄສຢ່າງເຕັມທີ່ເປັນເຈົ້າຂອງ, ແລະມີຄວາມຈໍາເປັນຕ້ອງເຮັດການວິເຄາະ DNA ຂອງສ່ວນທີ່ເຫຼືອຂອງຄອບຄົວໄດ້ບໍ່ມີ. ຖ້າ mutation ໃນ gene ທີ່ສອດຄ້ອງກັນໄດ້ຖືກພົບເຫັນ, ມັນອະນຸຍາດໃຫ້ແນ່ນອນອະນຸມັດການບົ່ງມະຕິຂອງ heredity, ການກໍານົດພັນສໍາລັບສ່ວນທີ່ເຫຼືອຂອງຄອບຄົວຫນັກຫນ່ວງໄດ້.

ປະໂຫຍດຂອງການບົ່ງມະຕິໂດຍກົງອີກປະການຫນຶ່ງແມ່ນພິຈາລະນາເພື່ອກໍານົດບັນທຸກ heterozygous ຂອງ mutations ທີ່ບໍ່ດີຈາກຍາດພີ່ນ້ອງແລະພໍ່ແມ່ຂອງຜູ້ເສຍຊີວິດຈາກພະຍາດດັ່ງກ່າວ. ນີ້ແມ່ນເປັນຄວາມຈິງໂດຍສະເພາະສໍາລັບພະຍາດ autosomal ໄດ້ເປີດກອງ. ຄົນດ້ອຍໂອກາດຂອງວິທີການໂດຍກົງກໍມີໄວ້ໃຫ້. ເພື່ອສະຫມັກຂໍເອົາໃຫ້ເຂົາເຈົ້າ, ທີ່ທ່ານຕ້ອງການທີ່ຈະຮູ້ວ່າຈໍາກັດໄດ້ gene ຜິດປົກກະຕິ, ໂຄງປະກອບການ Exon-intron ຂອງ spectrum ແລະການປ່ຽນແປງຂອງຕົນຂອງຕົນ. ບໍ່ພະຍາດ monogenic ທັງຫມົດໃນມື້ນີ້ໄດ້ຮັບຂໍ້ມູນຂ່າວສານດັ່ງກ່າວ. ວິທີການໂດຍກົງຂໍ້ມູນບໍ່ສາມາດໄດ້ຮັບການພິຈາລະນາທີ່ສົມບູນ, ເນື່ອງຈາກວ່າຫນຶ່ງແລະ gene ດຽວກັນອາດຈະມີຈໍານວນຂະຫນາດໃຫຍ່ຂອງ mutation pathological ທີ່ເຮັດໃຫ້ການພັດທະນາຂອງພະຍາດມໍລະດົກ.

ວິທີການທາງອ້ອມ

ວິທີການທາງອ້ອມໃນການວິນິດໄສ DNA ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ຢູ່ໃນທັງຫມົດ, ໃນກໍລະນີອື່ນໆ, ຖ້າ gene ຄວາມເສຍຫາຍບໍ່ໄດ້ກໍານົດ, ແຕ່ພຽງແຕ່ໂຄໂມໂຊມຫລືຖ້າການບົ່ງມະເສັ້ນບໍ່ໄດ້ໃຫ້ຜົນໄດ້ຮັບ (ມັນເກີດຂຶ້ນ, ຖ້າ gene ສະລັບສັບຊ້ອນອົງການຈັດຕັ້ງການແຜ່ກະຫຼືຂອບເຂດຂະຫນາດໃຫຍ່, ຖ້າຫາກວ່າມີຫຼາຍ mutations pathological). ວິທີການທາງອ້ອມປະຕິບັດການວິເຄາະແຍກອອກຕ່າງຫາກຂອງເຄື່ອງຫມາຍຫລາກຫລາຍໃນຄອບຄົວອັນລີນ. ເຄື່ອງຫມາຍພົບເຫັນຢູ່ໃນພາກພື້ນ chromosomal ດຽວກັນຫຼືສະຖານທີ່ມີການເຊື່ອມໂຍງຢ່າງໃກ້ຊິດກັບພະຍາດແລະສະແດງລຶບຫຼືສະແດງກິ່ງງ່າ, ການທົດແທນຈຸດ, ເຮັດເລື້ມຄືນ, ແລະ polymorphism ຂອງເຂົາເຈົ້າແມ່ນເນື່ອງມາຈາກປະລິມານທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງຈຸລັງຢູ່ໃນຕັນໄດ້.

ສະດວກທີ່ສຸດສໍາລັບການບົ່ງມະຕິ microsatellite ພິຈາລະນາແລະ minisatellite ຫລາກຫລາຍທາງອ້ອມ, ຊຶ່ງສາມາດແຈກຢາຍຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນຈີໂນມຂອງມະນຸດ. ມູນຄ່າຂອງເຂົາເຈົ້າໄດ້ສະແດງອອກໃນເນື້ອໃນຂໍ້ມູນຂ່າວສານສູງ, ຖ້າຫາກວ່າຄວາມເສຍຫາຍໃຫ້ໄລຍະຫ່າງທາງພັນທຸກໍາລະຫວ່າງເຄື່ອງຫມາຍແລະ gene ແມ່ນບໍ່ໃຫຍ່ເກີນໄປ. ໃນກໍລະນີສຸດທ້າຍ, ຄວາມຖືກຕ້ອງປະມານໄດ້ຖືກກໍານົດໃນລະດັບຂະຫນາດໃຫຍ່ຄວາມຖີ່ຂອງການລຽງຄືນໃຫມ່ລະຫວ່າງເຄື່ອງຫມາຍຫລາກຫລາຍແລະຄວາມເສຍຫາຍໄດ້. ວິທີການບົ່ງມະຕິທາງອ້ອມຍັງໃຫ້ຂັ້ນຕອນເບື້ອງຕົ້ນຂອງການບັງຄັບຄວາມຖີ່ອັນລີນຂອງການສຶກສາພົນລະເມືອງວິເຄາະບັນດາຄົນເຈັບແລະບັນທຸກຂອງ mutations, ບວກກັບຄວາມຈໍາເປັນຂອງການກໍານົດການຄາດຄະເນຂອງການລຽງຄືນໃຫມ່ຂອງ nonequilibrium ແລະຍືດຫມັ້ນຫມາຍແລະອັນລີນ mutant ໄດ້.

ວິທີການອື່ນໆ

ສ່ວນສັ້ນຂອງ RNA ຫຼື DNA, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບ gene ດຽວ visualized ຢູ່ພາຍໃຕ້ການສຶກສາກ້ອງຈຸລະທັດບໍ່ສາມາດເປັນໄປໄດ້, ເພາະສະນັ້ນ, ການລະບຸ mutations ຈໍາເປັນໂດຍການບົ່ງມະຕິທາງພັນທຸກໍາການແຜ່ກະ. ມີ "ທັງ Project ມະນຸດ", ເຊັ່ນດຽວກັນກັບຄວາມກ້າວຫນ້າຂອງອື່ນໆໃນພັນໂມເລກຸນແມ່ນຂະຫຍາຍຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງການບົ່ງມະຕິຂອງພະຍາດມໍລະດົກໄດ້ - ທັງກ່ອນແລະ postnatal. ວິທີການເຫຼົ່ານີ້ສາມາດສະຫນອງການກວດຫາແລະເຮັດໃຫ້ເປັນການຄາດຄະເນ poly- ແລະພະຍາດ monogenic, ທີ່ debut ໃຊ້ເວລາສະຖານທີ່ໃນການເປັນຜູ້ໃຫຍ່. ແຕ່ຫນ້າເສຍດາຍ, ເນື່ອງຈາກຄວາມສາມາດດ້ານວິຊາການຂອງການສຶກສາທາງພັນທຸກໍາການແຜ່ກະມີບາງຄັ້ງຈໍາກັດນອກເຫນືອດ້ານຈັນຍາບັນທີ່ຖືກກໍານົດທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບມໍລະດົກ, ໂດຍສະເພາະໃນເວລາທີ່ບົ່ງມະຕິແມ່ນໄວລຸ້ນແລະເດັກນ້ອຍ.

ໂຄງສ້າງແລະຈໍານວນຫລາຍຜິດປົກກະຕິທາງໂຄໂມໂຊມແມ່ນສາເຫດທົ່ວໄປທີ່ສຸດຂອງພະຍາດແລະມະເຮັງ, ແລະບໍ່ສົມປະກອບຫລາຍ. ຜິດປົກກະຕິທາງໂຄໂມໂຊມຈໍາເປັນຕ້ອງໄດ້ຮັບການກໍານົດ, ຊຶ່ງເປັນສິ່ງສໍາຄັນສໍາລັບການໃຫ້ຄໍາປຶກສາຄອບຄົວ - ການປະເມີນຄາດຄະເນ, ຄຽງຄູ່ກັບຄວາມສ່ຽງຈະເລີນພັນໃນການຖືພາໃນອະນາຄົດ. ການວິເຄາະໂຄໂມໂຊມເປັນ "ມາດຕະຖານຄໍາ" ການບົ່ງມະຕິພັນທຸກໍາ, ແຕ່ວ່າມັນແມ່ນຈໍາກັດ. ພຽງແຕ່ວິທີການຂອງ ການວິເຄາະທາງພັນທຸກໍາການແຜ່ກະ ສາມາດເຮັດໄດ້ຫຼາຍ, ເນື່ອງຈາກວ່າມີການນໍາໃຊ້ຮູບແບບສໍາຮອງເຕັກໂນໂລຊີຕາມປ້າຍ fluorescent ສາມາດຄວາມໄວສູງຂອງເຂົາເຈົ້າເພື່ອກໍານົດການປ່ຽນແປງໂຄໂມໂຊມ subtle ເປັນວ່າແມ່ນເພງນຶ່ງໃນດວງທີ່ຈະກວດສອບຄລາສສິກ ສຶກສາທາງ cytogenetic ຫະນູ. ເຕັກນິກການເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນນັບມື້ນັບຂະຫຍາຍຄວາມສາມາດວິນິດໄສຂອງພວກເຮົາ, ໃນເວລາທີ່ພິຈາລະນາ, ເດັກນ້ອຍທີ່ມີການພັດທະນາ, ປັນຍາອ່ອນ, ມີພະຍາດທາງພັນທຸກໍາອື່ນໆຈໍານວນຫຼາຍ.

ສິ່ງທີ່ຄົ້ນພົບ

ມັນເປັນສິ່ງສໍາຄັນຫຼາຍສໍາລັບມະນຸດໄດ້ໂຄງປະກອບການ gene ແລະຫນ້າທີ່ຂອງຄວາມຮູ້, ປະເພດຂອງຕົວປ່ຽນແປງ, ຄວາມສາມາດໃນການກວດສອບພະຍາດມໍລະດົກທີ່ເກີດຂຶ້ນໃນການເຊື່ອມຕໍ່ກັບການພັດທະນາຂອງກໍາມະພັນໂມເລກຸນ. ວິທີການຂອງຕົນມີຈຸດປະສົງໃນການສຶກສາຂອງ molecule DNA ໄດ້ - ແລະໃນເວລາທີ່ມັນເປັນປົກກະຕິ, ແລະໃນເວລາທີ່ມີຄວາມເສຍຫາຍ. ການກະກຽມຂອງລໍາດັບອາຊິດ deoxyribonucleic ຂອງ nucleotides (DNA) ຂະຫຍາຍໃນໄລຍະຈາກໄດ້ຮັບຕົວຢ່າງການລະບຸຊິ້ນສ່ວນບຸກຄົນ. ຫ່າງໄກສອກຫລີກຂອງ DNA ທັງຈາກຈຸລັງ, ການຈໍາກັດ (tearing), ເຄື່ອງຂະຫຍາຍສຽງ (cloning), electrophoresis ຂອງຊິ້ນ (ແຍກຄ່າໄຟຟ້າຂອງພວກເຂົາແລະນ້ໍາຫນັກໂມເລກຸນໂດຍ gel agarose). ຂໍມູນກ່ຽວກັບຊິ້ນສະເພາະໃດຫນຶ່ງທີ່ຕັ້ງຢູ່ດ້ານຂອງເສັ້ນດ່າງບໍ່ຕໍ່ເນື່ອງໄດ້.

ຫຼັງຈາກນັ້ນໄດ້ຮັບເຂົ້າໄປໃນກົດຫມາຍວ່າດ້ວຍການກັ່ນຕອງເປັນພິເສດ, ໂດຍຜ່ານການເຊິ່ງ passes ແຕ່ສົມ fragment ກັບ cloned ຊິ້ນ DNA ຫລືແທງ radioactive ສັງເຄາະເປັນການຄວບຄຸມ, ເຊິ່ງຈະມີຄວາມເທົ່າທຽມກັບຕົວຢ່າງການທົດສອບແຕ່ລະ. ຖ້າຫາກວ່າທ່ານມີການປ່ຽນແປງຕໍາແຫນ່ງຫລືຍາວປຽບທຽບກັບການສອບສວນ, ຖ້າຫາກວ່າຊິ້ນໃຫມ່ຫລືຫາຍໄປ - ທັງຫມົດນີ້ນີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ gene ວິເຄາະໄດ້ຜ່ານການປັບໂຄງສ້າງໃນລໍາດັບ nucleotide ໄດ້. ມີແປດເຕັກນິກພື້ນຖານຂອງການສຶກສາທາງພັນທຸກໍາການແຜ່ກະແມ່ນ: ລໍາດັບ (ການຕັດສິນໃຈຂອງລໍາດັບ DNA), ຕິກິຣິຍາລະບົບຕ່ອງໂສ້ໂພລິເມີ (ເພີ່ມຂຶ້ນໃນຈໍານວນຂອງລໍາດັບເຫດການ), ການກະກຽມຂອງເມີຮູ້ຈັກພັນທຸກໍາ, ໂຄນ DNA, ການຜະລິດຂອງໂມເລກຸນ recombinant ມາໂປຣຕີນເນື່ອງຈາກໂມເລກຸນ recombinant, ສ້າງທີ່ກໍານົດໄວ້ສໍາເລັດ (ການເກັບກໍາ ຫໍສະຫມຸດ) cloned ຊິ້ນທີ່ໄດ້ຮັບໂດຍການນໍາໃຊ້ຂໍ້ຈໍາກັດ.